Вакуумные системы для забора крови

Вакуумные системы для забора крови представляют собой современный метод, применяемый в лечебных учреждениях.

Вакуумные системы для забора крови называют закрытыми, потому, что кровь из вены через специальную двухстороннюю иглу попадает в герметично закупоренную стерильную пластиковую или стеклянную пробирку с подготовленным на заводе дозированным вакуумом. Затем эта пробирка с материалом отправляется в лабораторию, где используется непосредственно в анализаторах.

Наиболее распространены вакуумные системы: Vacutainer, Vacuette, Improvacuter, Neovac и т.д.

Вакуумная система состоит из трех основных компонентов:

• стерильная пробирка с дозированным содержанием вакуума;
• иглодержатель;
• специальная двусторонняя игла с клапаном безопасности.

Для взятия крови игла вкручивается в держатель, после чего осуществляется процедура венепункции. Далее к системе игла-держатель последовательно присоединяются вакуумные пробирки. Кровь под действием вакуума втягивается через иглу из вены напрямую в пробирку и смешивается с химическим реактивом. Тщательное дозированный объем вакуума обеспечивает точное соотношение кровь-реагент в пробирке.

Рис. 1. Система для взятия крови BD Vacutainer.

Держатели для вакуумных систем выпускаются в нескольких вариантах. Они могут быть как одноразовые, так и многоразовые.

К многоразовым держателям, не имеющим контакта с кровью пациента, относятся короткая и длинные версии стандартного держателя (рис.4, а) и держатель (б) с облегченным сбросом иглы. Последний позволяет после использования простым нажатием кнопки сбрасывателя снять иглу, что избавляет от необходимости её выкручивать. 

Держатель со встроенным люер-адаптером (рис. 2, в) является одноразовым и позволяет использовать стандартные иглы и катетеры без дополнительных аксессуаров. Благодаря смещенному центру и подыгольному конусу, расположенному эксцентрично, держатель позволяет вводить иглу в вену под меньшим (около 10º) углом. Камера, имеющаяся в держателе, при попадании иглы в вену сразу наполняется кровью. Все эти преимущества позволяют проводить взятие крови у пациентов с проблемными венами (педиатрия, пожилые пациенты, реанимация).

Специальный держатель, предназначенный для работы с потенциально зараженными пациентами (рис. 2, г), автоматически убирает иглу внутрь корпуса при закрытии крышки держателя, сводя риск ранения персонала к минимуму.

Широкий выбор аксессуаров позволяет скомпоновать удобную вакуумную систему, максимально соответствующую как физио-логическим и анатомическим особенностям пациента, так и требованиям подготовки проб для любого анализа. Например, при «трудных» венах берут специальную иглу-бабочку; если уже установлен центральный венозный катетер, используют луер-адаптер; для длительной транспортировки и хранения подбираются пробирки с соответствующими консервантами; во избежание смешения разделенных компонентов крови после центрифугирования применяют пробирки с гелем и т.п.

Вариации вакуумной системы для забора крови

1. Вакуумная пробирка, держатель, люер-адаптер и односторонняя игла.

2. Вакуумная пробирка, держатель, люер-адаптер и игла-бабочка.

3. Вакуумная пробирка, держатель с иглой-клапаном, игла-бабочка.

В зависимости от назначенного вида исследования образец крови должен собираться при наличии строго определенных добавок:

• для получения плазмы кровь собирают с добавлением антикоагулянтов: ЭДТА, цитрата, оксалата, гепарина;
• для исследований системы свертывания крови применяется только цитратная плазма (в точном соотношении 1:9 раствора цитрата натрия и крови);
• для большинства гематологических исследований используют венозную крови с солями этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА; К₂- или К₃-ЭДТА);
• для получения сыворотки кровь собирают без антикоагулянтов;
• для исследования глюкозы кровь собирают с добавлением ингибиторов гликолиза (фтористого натрия или йодоацетата);
• для исследования ряда нестабильных гормонов (адренокорти-котропного гормона, кальцитонина) используют апротинин;
• с целью сохранения в образце крови эритроцитов и лейко-цитов применяют смесь антикоагулянтов с добавками.

Для получения образцов крови вариантов проб для разных видов исследований необходимо соблюдать очередность заполнения пробирок. Основное правило – вначале проводится взятие крови без антикоагулянтов, затем в пробирки с антикоагулянтами во избежание загрязнения ими.

Последовательность наполнения пробирок:

1. кровь без добавок – для получения гемокультуры для микробиологических исследований;
2. кровь без антикоагулянтов – для получения сыворотки, используемой при клинико-химических и серологических исследованиях;
3. кровь с цитратом – для получения плазмы, используемой при коагулологических исследованиях;
4. кровь с гепарином – для получения плазмы, используемой при биохимических исследованиях;
5. кровь с ЭТДА – для получения цельной крови, используемой при гематологических исследованиях, и плазмы, использу-емой для некоторых клинико-химических исследований.

При использовании современных анализаторов достаточны следующие объемы образцов:

• для биохимических исследований: 4-5 мл; при использовании гепаринизированной плазмы – 3-4 мл;
• для гематологических исследований: 2-3 мл крови с ЭДТА;
• для исследований свертывающей системы: 2-3 мл цитратной крови;
• для иммуноисследований: 1 мл цельной крови для 3-4 анализов;
• для исследования СОЭ: 2-3 мл цитратной крови;
• для исследования газов крови: артериальная или венозная кровь с гепарином – 1 мл.

Для обозначения содержимого с различными добавочными компонентами применяют цветное кодирование закрывающих их пробок.

Пробирки с биологическим материалом (кровью) медицинские сестры подписывают в присутствии пациента (до или после взятия крови) маркером по стеклу/пластику или ручкой на бумажной этикетке пробирки.

Вакуумные пробирки: виды, цветовая кодировка

Вакуумные пробирки представляют собой основной компонент для взятия венозной крови. Пробирки производятся из стекла или специального материала полиэтилен-терфталата (пластика и стекла), который отличается особой прочностью и препятствует газообмену. Они изготовляются и стерилизуются в заводских условиях, предназначены для одноразового применения. Пробирки выпускаются различных объемов и размеров и уже содержат все реагенты и добавки, необходимые для проведения анализа. Вакуум в пробирках обеспечивает взятие необходимого объёма крови и, соответственно, позволяет гарантировать соблюдение правильного соотношения крови и реагента.

Пробирка состоит из трех основных частей:

• непосредственно пробирка;
• безопасная крышка с идентификационным кольцом;
• этикетка.

Вакуумные пробирки с наполнителем (не реагентом) содержат в себе гель либо гранулы, и используются в случаях, когда требуется разделить составляющие крови. Гель обволакивает сгущенную кровь, обособляя ее от сыворотки, гранулы же превращаются в своеобразный барьер, работая аналогично гелю.

Для некоторых видов анализов добавлен реагент (литий, гепарин, ЭДТА и т.п.).

Вакуумные пробирки закрываются резиновыми пробками или специальными крышками Hemogard, которые обеспечивают безопас-ность лаборанта при работе с пробой.  Цвет крышки указывает на вид наполнителя и назначение пробирки. Цветовая кодировка пробирок соответствует международному стандарту ISO 6710.

Виды пробирок

Пробирки для получения сыворотки

Сыворотка крови – наиболее часто используемый материал в клинико-диагностических лабораториях. Для получения сыворотки кровь должна полностью свернуться.

Пробирки для получения сыворотки бывают двух видов – стеклянные и пластиковые. В стеклянных пробирках функцию активатора свертывания выполняет непосредственно само стекло, так как в его состав входит кремний, ускоряющий процесс коагуляции. В пластиковые пробирки для ускорения процесса коагуляции добавляются активаторы свертывания – кремнезем и/или тромбин. Пробирки могут содержать также специальный гель либо гранулы для четкого отделения сыворотки от сгущенной крови.

Стеклянные пробирки без наполнителя и пластиковые пробирки с кремнеземом для исследования сыворотки различают по красной крышке (рис. 3, а).

Пробирки для получения сыворотки с тромбином отличаются окрашенностью крышки или резиновой пробки в оранжевый цвет (рис. 3, б, в). Тромбин является природным активатором свертывания и значительно сокращает время образования сгустка (3–5 мин.). Пробирки с тромбином применяются для ускоренного получения сыворотки, поэтому чаще всего используются для экспресс-анализов, когда требуется срочно получить сведения о составе крови пациента, к примеру, в реанимационной палате и т.д. После заполнения пробирку с тромбином следует обязательно перемешать путем переворачивания 5–6 раз. Полное свертывание крови происходит за 5 минут.

Пробирки с гелем для получения и отделения сыворотки производятся только из пластика, и их можно отличить по желтой крышке (рис. 3, г). С целью лучшего отделения сгустка крови от сыворотки в пробирки добавлен гель. После взятия пробы пластиковые пробирки следует перемешать путем переворачивания 5–6 раз.

Пробирки для исследования плазмы

Для получения плазмы в пробирках используется литиевая или натриевая соль гепарина, распыленная на внутреннюю поверхность пробирки. Гепаринизированную плазму обычно используют для биохимического и иммунологического анализа.

Основное действие гепарина – торможение перехода растворимого фибриногена в нерастворимый фибрин вследствие блокирования активности тромбина.

Пробирки без геля с гепарином (гепарин лития или гепарин натрия) отличаются зеленым цветом крышки. Гепарин лития используется для клинических анализов крови, гепарин натрия – при подборе дозы и мониторинге терапии препаратами лития. Пробирки с гепарином и разделительным гелем для получения плазмы имеют светло-зеленую крышку, в них используется только литиевая соль гепарина. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8–10 раз. Центрифугирование следует производить сразу после взятия крови.

Пробирки для коагулологических исследований

При взятии образцов для исследования системы гемостаза стандартным антикоагулянтом является цитрат натрия. Его механизм действия основан на связывании ионизированного кальция крови, что ведет к обратимому блокированию процесса коагуляции.

Выпускаются как стеклянные, так и пластиковые пробирки с крышкой голубого цвета. Для предотвращения испарения цитрата натрия пластиковые пробирки изготовляются по особой технологии из разного рода пластика и имеют двойные стенки.

Очень важно соблюдать правильное соотношение крови  к антикоагулянту как 9:1. Недостаток цитрата в пробе ведет к образованию микросгустков и коагуляции пробы, а избыток – к искажению результатов за счет связывания кальция из реагентов.

При взятии пробы в несколько пробирок у одного пациента пробирка с цитратом должна заполняться до пробирки с активатором свертывания. Сразу после взятия образца пробирку необходимо аккуратного перемешать не менее 5 раз.

Для проведения некоторых коагулологических анализов также могут использоваться пробирки с комплексным наполнителем CTAD (Цитрат натрия/Теофиллин/Аденозин/Дипиридамол).

Пробирки для гематологических исследований

В качестве антикоагулянта в пробирках для гематологических исследований цельной крови используется ЭДТА (калиевая соль  этилендиаминтетрауксусной кислоты). Противосвертывающее действие ЭДТА обеспечивается за счет связывания ионов кальция в крови. В пробирках со светло-лиловой (сиреневой) крышкой антикоагулянт находится в виде раствора или порошка, распыленного на внутреннюю поверхность пробирок.

Для обеспечения правильного соотношения крови и антикоагулянта пробирка с ЭДТА должна заполняться точно до указанного объема. Недостаток ЭДТА в пробе приводит к ее коагуляции, а избыток – к сморщи-ванию клеток крови и искажению таких клинических показателей, как гематокрит, размер клеток и т.д. Сразу после взятия крови в пробирку с ЭДТА ее необходимо тщательно перемешать, переворачивая 8–10 раз.

Пробирки для специальных тестов

Пробирки для исследования глюкозы

Для стабилизации глюкозы используются пробирки с серой крышкой и следующими наполнителями: фторид натрия и оксалат калия, йодоацетат и лития гепарин, фторид натрия и ЭДТА.

Пробирки должны заполняться полностью до указанного на них объема. После взятия пробы пробирки следует перемешать, переворачивая 6–8 раз. Поскольку пробирки с фторидом/оксалатом особенно подвержены гемолизу, их необходимо перемешивать с особой осторожностью.

Пробирки для исследования микроэлементов

Микроэлементы находятся в крови в крайне малых количествах, поэтому используемые материалы должны исключать возможность загрязнения образца инородными примесями. Это возможно при применении специальных пробирок с крышкой синего цвета.

Пробирки предназначены для исследования цинка, железа, меди, кальция, селена в крови; а также токсикологических исследований свинца, кадмия, мышьяка, сурьмы.

Взятие образца и пробоподготовка производятся в соответствии с используемым наполнителем: они могут быть с активатором свертывания, К₂-ЭДТА или гепарином натрия или без наполнителя.

При анализе сыворотки на наличие микроэлементов в следовых количествах не рекомендуется использовать стандартные пробирки с красной крышкой, так как они содержат повышенную концентрацию цинка и других микроэлементов.

При взятии крови у одного пациента сразу в несколько вакуумных пробирок необходимо пробирку для микроэлементов следует заполнять последней для снижения вероятности загрязнения пробы через иглу.

Пробирки для исследования нестабильных гормонов белковой природы

Для сохранения нестабильных ферментов и гормонов белковой природы в пробирках вместе с антикоагулянтом ЭДТА используется ингибитор протеиназы – апротинин. Он применяется для стабилизации таких гормонов и ферментов, как ренин, адренокортикотропный гормон, глюкогон, соматостин, кальцитонин, остеокальцин, b-эндорфин, секретин, нейротензин, вазоактивный интестинальный пептид. Апротинин содержится в пробирках объемом 5-10 мл с розовой пробкой.

Пробирки для определения группы крови с розовой крышкой

Эти пробирки используются как для определения группы крови, так и для перекрестной пробы при переливании крови.  Выпускаются без наполнителя, с кремнеземом (активатор свертывания) или К₂ЭДТА. Специальная этикетка на пробирке удобна для записи информации о доноре и пациенте.

Пробирки для стабилизации цельной крови (для иммуногематологии)

Пробирки для стабилизации цельной крови содержат комбинированный наполнитель ACD, состоящий из активного антикоагулянта тринатрия цитрата, лимонной кислоты, которая обеспечивает буферный раствор с тринатрия цитратом, и декстрозы, являющейся питательным веществом для эритроцитов. Стеклянные пробирки с ACD можно отличить по светло-желтой крышке, они обычно используются в отделениях иммунной гематологии для анализа поверхностных антигенов лейкоцитов (HLA-типирование, некоторые приложения проточной цитометрии, исследование функций лейкоцитов и специальные иммунологические тесты).

Сразу же после заполнения пробирки с ACD пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8–10 раз.

Пробирки для измерения СОЭ по методу Вестергрена

Система для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Вестергрена состоит из вакуумных пробирок для взятия венозной крови и штатива с градуированной шкалой. Стерильные стеклянные пробирки, закрытые черной крышкой Hemogard, содержат раствор цитрата натрия. При полном заполнении пробирки кровью (5,2 мл) достигается соотношение крови и антикоагулянта, равное 4:1.

Штатив рассчитан на 10 пробирок, каждая ячейка снабжена механизмом, с помощью которого совмещается уровень пробы в пробирке с нулевой отметкой шкалы штатива. Измерение СОЭ проводится в закрытой первичной пробирке, при этом пробу не нужно переливать и дополнительно разбавлять.

Хранить образец до анализа нужно при комнатной температуре, вдали от солнечного света и отопительных приборов. Анализ необходимо провести в течение 6 часов после взятия пробы. Для этого необходимо пробирка помещается в специальный штатив, стоящий на ровной горизонтальной поверхности. В течение всего времени проведения теста штатив должен оставаться неподвижным. Далее совмещают нулевую метку с мениском образца и по истечении 60 минут зафиксируют показатели СОЭ по градуированной шкале штатива между осевшими эритроцитами и плазмой.

Пробирки для проведения анализов методами молекулярной диагностики

Пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики различаются по крышке жемчужно-белого цвета и применяются для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитах, а также для проведения анализов методами молекулярной диагностики (например, ПЦР) и идеально подходят для хранения и транспортировки плазмы.

Пробирки содержат антикоагулянт К₂ЭДТА и полиэстерный гель. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя кровь необходимо тщательно перемешать с антикоагулянтом, аккуратно переворачивая 8-10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

Плазму в пробирках можно хранить в замороженном виде при -70°C. В пробирках стабильность РНК ВИЧ и вируса гепатита С сохраняется в течение 72 часов при комнатной температуре.

Пробирки для выделения мононуклеарных клеток крови (моноцитов и лимфоцитов)

Пробирки позволяют отделить мононуклеарные клетки периферической крови в один прием, причем в одной первичной пробирке, внутренние стенки которой покрыты силиконом для минимизации неспецифической активации клеток.

    Пробирки выпускаются двух видов:

• с сине-черной пестрой пробкой (пробирки с натрия цитратом);
• с красно-зеленой пестрой пробкой (пробирки натрия гепарином).

Пробирки содержат антикоагулянт разделительный гель и специальную жидкость фиколл, создающую градиент плотности для разделения мононуклеаров. Данные пробирки предназначены для обнаружения злокачественных новообразований, анализа генетических маркеров, исследование провирусной ДНК, РНК вирусов (в т.ч. ВИЧ).